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...resolviendo este sencillo (y feliz) test de Bioquímica. Es mejor que los crucigramas en el periodico!!


1. Son marcadores moleculares caracterizados por ser bialélicos y que se denominan de un sólo nucleótido:

a) RFLPs
b) VNTRs
c) SNPs
d) STRs
e) Ninguno de los anteriores
f) Todos los anteriores

2. Son los marcadores moleculares que requieren del empleo de enzimas de restricción:

a) RFLPs
b) VNTRs
c) SNPs
d) STRs
e) Ninguno de los anteriores
f) Todos los anteriores

3. Son marcadores moleculares caracterizados por encontrarse en sucesiones repetidas (tándem) de 2 a 7 nucleótidos

a) RFLPs
b) VNTRs
c) SNPs
d) STRs
e) Ninguno de los anteriores
f) Todos los anteriores

4. Son los marcadores más adecuados cuando se trata de muestras muy degradadas:

a) RFLPs
b) VNTRs
c) SNPs
d) STRs
e) Ninguno de los anteriores
f) Todos los anteriores

En los últimos tiempos, se ha incorporado a la Genética Forense una técnica complementaria a los STRs, los llamados marcadores SNPs (Single Nucleotid Polimorphisme), que permiten obtener ADN de muestras muy degradadas o muy pequeñas ─es posible incluso extraer el ADN de algunas huellas dactilares latentes─, e incrementan las posibilidades informativas ─estudio del origen geográfico, por ejemplo. En la actualidad, los STRs siguen siendo los marcadores más empleados, y los SNPs se utilizan, ante todo, para muestras muy degradadas.

5. Su empleo puede aplicarse al DNA nuclear:

a) RFLPs
b) VNTRs
c) SNPs
d) STRs
e) Ninguno de los anteriores
f) Todos los anteriores
ForenseRFLPs
•Enzimas de restricción reconocen secuencias de DNA específico.
•Cualquier cambio en la secuencia del DNA crea o elimina sitios de restricción particulares.
•Alterando el tamaño de uno o más fragmentos del DNA (Southern blot).
•Población no tienen los mismos sitios de restricción


6. Para qué sirven y cuáles son las características que hacen a las tarjetas FTA uno de los materiales de mayor uso en los laboratorios de Genética Forense.

Es una herramienta revolucionaria para simplificar la recolección, archivado, purificación y análisis de DNA y RNA obtenidos de un amplio surtido de fuentes biológicas, tales como sangre total, raspados bucales, materiales de planta, plásmicos, tejido y microorganismos.
Ventajas: No hay fractura de DNA, purificación simple, fácil almacenamiento.
Duración de la muestra: Hasta -81°C seis meses. Temperatura ambiente y humedad de 6 meses sin protección. Temperatura ambiente y humedad 11 años con protección.
Aplicación: Aislamiento de ADN Genómico; aislamiento de ADN mitocondrial, aislamiento de ADN proviral.

8. Explica con detalle en qué consiste y cómo se realiza una extracción con Chelex.

El Chelex es un compuesto de copolimeros de estireno divinilbenceno, que contiene iones inminodiacetato apareados, los cuales actúan como quelantes, agrupando los iones metálicos polivalentes como el magnesio, agrupando los iones metálicos polivalentes como el magnesio. El retido de magnesio en la reacción inhibe a las enzmas , muy útil en ciencia forense, porque en concentraciones de 5 al 10% de Cheles-100 es capaz de depurar suficientemente la gran mayoría de las muestras, dejándolas aptas para su estudio posterior, especialmente útil en casos de amplificación de PCR.
• Realizar manchas en tela de algodón estéril o papel filtro con 500microlitros de sangre fresca.
• Cortar un pedazo de tela de 3 mm de diámetro y colocarla en un tubo de 15ml, de ser varias manchas, utilizar una hoja de bisturí nueva por cada una o una tijera esterilizada luego de cada corte para evitar contaminación.
• Colocar 1mL de agua estéril desionizada.
• Incubar a temperatura ambiente entre 15 y 30°C, por aproximadamente 20 minutos. Mezclar ocasionalmente por inversión. A su vez hervir más agua.
• Spin en microcentrifuga por 3 minutos a 12500 rpm.
• Desechar el sobrenadante.
• Añadir 130 microlitros de Chelex al 5% (Chelex-100 Resin, BioRad).
• Mezclar con la ayuda de vórtex a la mayor velocidad por 10 segundos.
• Con una aguja incandescente hacer un pequeño agujero a los tubos para que el contenido no ebulla por el calor o salte.
• Colocar los tubos en agua hirviendo por 8 minutos, es preferible usar tubos con rosca para que el contenido no se abra ni se contamine.
• Mezclar en vórtex a alta velocidad por 10 segundos.
• Centrifugar por 3 minutos a 12500 rpm.
• Almacenar a 4°C.
• Antes de usar las muestras almacenadas se debe centrifugar por 3 minutos a 12500 rpm.
Extracción de ADN en pelo con bulbo con resina quelante.chelex 100

• Utilizar un escalpelo limpio y cortar una porción de 5-10 mm de raíz del pelo.
• Añadir framento de pelo 200mcl de Chelex al 5% en un tubo de 1.5mL.
• Incubar toda la noche a 56°C, tiempo minimo 8 horas.
• Mezclar en un voprtex a alta velocidad por 10 seg.
• Poner en agua hirviendo durante 8 min.
• Mezclar con vórtex a alta velocidad por 10 segundos.
• Centrifugar por 3 minutos a 12500 rpm.
• Añadir 40 mcl de sobrenadante a la mezcla de la PCR.
No hay que olvidar que los pelos con raíz (bulbo= arrancados, frescos, son los mejores para obtener ADN de alto peso molecular en gandes cantidades).

Extracción de ADN de pelo sin bulbo usando resina quelante Chelex-100.
• Utilizar un escalpelo limpio ycortar una porción de 2 a 3 cm de pelo.
• Añadir framento de pelo a 200 mcl de Chelex al 5% en un tubo de microcentrifuga de 1.5ml.
• Incubar 56°C durante 30 min a una hora.
• Mezclar en un vórtex a alta velocidad por 5 a 10 min.
• Spín en una microcentrifuga durante 10-20 seg a 12500 rpm.
• Colocar en agua hirviendo durante 8 min.
• Mezclar en un vortex a alta velocidad por 5-10 seg.
• Centrifugar por 3 min a 12500 rpm.
• Añadir 20 mcl de sobrenadante a la mezcla de PCR.

Una muestra se introduce en un tubo de Eppendorf y se mezcla en 500 μl de una solución de resina Chelex-100 al 10%. Esta se prepara previamente disolviendo la resina a la proporción reseñada en agua ésteril desionizada a 60°C y removiéndola. Se añade a la solución 15 μl de proteinasa K (Boehringer Mannheim) a una proporción de 10 mg/ml, incubando la mezcla a 55ºC en agitación continua durante una hora. A continuación, la mezcla se introduce durante
15 minutos a 100ºC para intensificar la desnaturalización de las proteínas. Los tubos que contienen el ADN extraído y la resina Chelex en unión con las proteínas degradadas se almacenan a 4ºC o –20ºC. Antes de utilizarlo se agita en un vórtex y se centrifuga a 10.000 rpm durante 10 segundos para depositar la masa que forman la resina y las proteínas.
Posteriormente, se vuelve a centrifugar el tubo durante 10 minutos para diferenciar la porción superficial en la que se encontrará el ADN y la inferior que incluye a la resina Chelex-100, las proteínas desnaturalizadas y otros elementos.
Para la utilización en la PCR, se toman 2 μl del sobrenadante por cada 10 μl de volumen final de la mezcla para la PCR.

Este método utiliza el mismo protocolo, pero no se añade la proteinasa K en la mezcla de tejido y resina Chelex-100

Extracción ADN: El tamaño de los tejidos es de secciones de 5mcm (priomedio de volumen recogido de 1.44ml) y el tamaño de las muestras de bipsias en secciones de 1’ mcm (promedio de volumen 0.034 ml), fueron cortadas y procesadas de acuerdo a los siguientes métodos.
Método 1.
-100mcl muestra tamaño normal y 50mcl de muestra de biopsia.
-Resusopendido en solución de resina Chelex-100 al 5%.
-Ebullición por 20 minutos.
Método 2.
-Con pretratamiento.
-100 mcl muestra tamaño normal y 50 mcl de muestra de biopsia.
-Resuspendidas en 100 mcl solución tampón que contiene 200 mcg/ml de Proteinasa K (50mM de KCl, 1.5mM MgCl2, 10mM TRIS-HCL, 0.5% Tween 20- pH 9 a 25°C).
-Adicionar Solución de Chelex-100 al 5 %.
-La mezcla es llevada a ebullición por 8 minutos.
-Después de la ebullición, todos los tubos se refrigeran con hielo, se centrifuga durante 5 minutos a 18000 rpm x g.
-Es usada como cadena de molde de ADN una alícuota de 5mcl de sobrenadante (10 mcl para la muestra de biopsia de tejidos).

El efecto de Chelex impide la degradación del ADN, al parecer por los iones metálicos que pueden acturar como catalizadores en la ruptura del ADN a altas temperaturas sin dejar de baja fuerza iónica.
Las plantillas con Chelex son mejores conservadas.

7. Explique por qué razón el DNA extraído con Chelex no es visto cuando es llevado a electroforesis en agarosa o poliacrilamida.

No se revela con gel de agarosa por la poca interacción con el bromuro de etidio (Marcadores de la electroforesis: Para la visualización de los ácidos nucleicos se utiliza un colorante fluorescente, el bromuro de etidio. Este colorante tiene la propiedad de intercalarse entre las bases nitrogenadas del ADN).
10 ng de carril de concentración de DNA no se ve. Poco DNA tendrá mucha calidad.
25-500 pares de bases es lo que lee agarosa.
DNA 100 pares de bases no se puede leer.

9. Explique cuál es la importancia de cuantificar el DNA extraído de un indicio biológico.


10. Cuáles son las consideraciones idóneas que una técnica de extracción debiera presentar.

La técnica debe poseer un buen porcentaje de recobro de la muestra.
Tener un menor número de pasos donde se pueda perder o degradar la muestra.
Cuantificar el ADN de la muestra